广东药科大学课堂教案
日期：2017.04.07-11 学时：4
授课内容（章/节）第六章 分子生物学研究法（下）-1
教学目的和要求
掌握：
1、单核苷酸多态性(SNP)的概念
2、分子克隆载体的功能与特点
3、蓝白斑筛选试验的原理
4、基因克隆的概念
5、完整基因克隆的具体流程；目的基因获取的具体途径、外源基因与载体连接的方式、重组子的筛选方式
6、cDNA的文库的概念及文库的构建流程；cDNA第一条链和第二条链的合成方式
7、RACE技术的原理与特点
8、cDNA差示分析法的原理与特点
熟悉：
1、单核苷酸多态性(SNP)技术的应用领域
2、遗传标记基因的作用；遗传标记基因的种类
3、质粒的生物学特性
了解
1、单核苷酸多态性(SNP)的意义
2、常用的遗传标记基因
3、质粒载体的发展状况、常见的质粒载体
4、重组DNA导入宿主菌的方式及对宿主菌的要求
5、RACE技术的操作步骤
6、cDNA差示分析法的操作步骤
教学内容（★表示重点；▲表示难点）
1、单核苷酸多态性(SNP)的意义及其应用（★）
2、分子克隆载体的功能与特点（★▲）
3、遗传标记基因的种类：抗性标记基因、营养标记基因和生化标记基因
4、常用的遗传标记基因：四环素抗性基因、氨苄青霉素抗性基因、氯霉素抗性基因、卡那霉素基因、β—半乳糖苷酶基因、葡萄糖苷酸酶基因、荧光素酶基因和发光蛋白质基因
5、载体－质粒载体：质粒载体的生物学特性、质粒载体的发展状况；常见的质粒载体pBR322、pUC系列载体、T载体及穿梭质粒载体（▲）
6、完整基因克隆的具体流程：目的基因的获取、克隆载体的选择和构建、外源基因与载体的连接、重组DNA导入受体菌、重组体的筛选（★▲）
7、cDNA文库的构建：高质量mRNA的制备、cDNA第一条链的合成、cDNA第二条链的合成、双链cDNA分子与载体进行连接（★）
8、RACE技术及其操作：操作步骤、RACE操作步骤中去磷酸化的目的（▲）
9、应用cDNA差示分析法克隆基因（▲）
教学方法及教学手段
教学方法：讲授式＋启发式、课堂讨论与小结。
教学手段：视频、flash、ppt、板书，图片。
以讲解和视频演示为主，重点在于对原理的讲解，由于许多内容涉及具体的实验操作，用视频进行介绍，使学生对实验过程有较为直观的印象，这部分内容需要在今后学生实验中让学生具体体会，故不作重点讲解，要求学生了解。
作业：
复习上述的内容，重点掌握实验技术的原理，查阅相关文献加深对实验技术的认识。预习酵母单杂交和双杂交以及RNA干扰技术。