1.实验教学内容
开设课程综合性实验,在实验总体设计上,以基因克隆为主线,整合了《分子生物学》和《生物信息学》的实验教学内容。教学内容上,整个综合性实验涵盖了生物信息学(从GeneBank数据库查询所需要序列并对序列信息进行分析、应用引物设计软件和引物分析软件进行扩增引物的设计)和分子生物学(细胞总RNA的提取、运用RT-PCR进行基因扩增、目的基因与载体的连接、转化及重组子的筛选与鉴定)教学大纲中规定应掌握的基本技能,具有较强的系统性与连贯性; 教学组织上,实行小班教学,2-3人一组,增加学生的动手机会;考核形式上,一方面通过实验技能的考核检测学生的动手能力,另一方面改变传统的递交单份实验报告的考核形式,模拟本科生毕业实习考核形式,要求学生递交分子生物学综合性大实验课程论文,最终考查学生对基因克隆的整个实验流程及运用数据库进行信息筛选的掌握情况,培养学生的科研素养,活跃教学气氛,巩固教学效果。
2.实验课程设计流程图
分子生物学(跨课程)综合性实验流程
3.实验项目及学时分配
序号 | 内容 | 学时 | 实验要求 | 实验类型 |
1 | 小鼠肝脏总RNA提取 | 6 | 掌握总RNA的提取的原理和具体步骤。 | 综合实验 |
2 | RNA质量检测及cDNA一链合成 | 6 | 掌握核酸琼脂糖电泳的基本原理和具体操作方法;掌握逆转录的基本原理、基本操作步骤 | 综合实验 |
3 | 基因PCR扩增及产物鉴定 | 6 | 掌握PCR的基本原理和操作步骤 | 综合实验 |
4 | 扩增产物纯化及电泳鉴定 | 6 | 掌握切胶回收的基本原理和操作 | 综合实验 |
5 | RT-PCR产物克隆 | 6 | 掌握感受态的概念、感受态制备和转化的基本操作方法;掌握TA克隆的原理;掌握连接,转化,涂板等DNA重组的操作步骤 | 综合实验 |
6 | 转化子的筛选及PCR鉴定 | 6 | 掌握重组子的菌落PCR快速鉴定法的原理和操作 | 综合实验 |